SD大鼠,体重240~260g ,雄雌个半.把大鼠固定在立体定向仪上.调整门齿沟平面高度,使门齿沟平面比耳间线mm、矢状线mm(向左或向右) 为进针的,以1mm/min的速度进针,深约5.5mm,以3μl/min的速度向该侧侧脑室内注射1mg/ml 的人海酸溶液15~20μl,约5min,置留5min.关颅后的10min内,大鼠出现缺氧的症状,表现为口鼻及四肢发绀,甚至会出现呼吸心跳停止,应及时给予吸氧及心外心脏按摩等处理,大部分大鼠可以存活.0.5~1h内癫痫发作达到最高水平,少数雄性大叔出现癫痫持续状态,至呼吸心跳停止,此时,除对症处理外,还给予肌内注射地西泮.
(1)行为学观察 参照Racine分级标准(见大鼠青霉素癫痫模型).根据大鼠癫痫状表现分为3期：急性期(手术后1~2d)、潜伏期(急性期后10d~3个月)、慢性期(3个月以后).结果显示：①急性期 海仁酸注射几分钟后,大鼠出现动须.面部肌肉颤动,多数先为同侧,后发展为两侧,出现凝视、点头、咀嚼(能听到明显的磨牙声)、面部抽搐,留涎,向空中跃起、摔倒,持续3~5h.发作间期,面部仍保持颤动.后多次发作,出现肌肉痉挛性前窜的动作.可间断发作2d.②潜伏期 癫痫症状完全消失,恢复正常,体质量回升,易激惹,抓持时出现行为,可逐渐恢复正常.此期持续3个月左右.③慢性期 自发性反复的癫痫发作是这一时期的主要特点.表现为咀嚼和点头运动,持续时间3~5s.经过不同的发作时间后.经常出现二次发作,伴有不动、立毛和呼吸急促,阵挛性抽搐,有时站立.此期大鼠正常,体质量仍可持续上升.提示应用该方法能较稳定地复制出慢性颞叶癫痫动物模型.
(2) 脑电图检查 模型组大鼠急性期均能记录到癫痫样波,急性期癫痫发作时,出现明显的癫痫样波,表现为丛集性、阵发性,持续时间约1~2min,最初有明显的定位价值.慢性期癫痫动物模型的脑电图可以记录到持续存在散在发作的棘波,与急性期显著不同的是,此期不是只有进针侧颞叶存在癫痫灶,而是两侧同时同等存在,并且波幅较急性期小.
(3)脑海马病理学检查 ①光学观察结果 慢性期主要表现为海马的硬化,具体体现在明显的神经细胞的缺失,以CA3区锥体细胞的变化较明显,主要表现为细胞固缩性坏死.②透射电镜观察结果 模型组大鼠在慢性期海马神经细胞出现较多的暗细胞(颜色较其他细胞明显偏暗的细胞),神经细胞的数量减少,胶质细胞的数量增多;突触间隙及前后突触体内囊泡的数量明显减少.
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