【摘要】目的：探讨大鼠 采血方法,提高大鼠实验的成功率.方法：采用SD大鼠300只进行采血.腹主动脉采血法：在腹主动脉分叉处向心端1～3mm处为最佳穿刺点.眼眶后静脉丛的采血法：垂直插入内眦并向眼底方向转动以便切开静脉丛.心脏穿刺采血方法：剑突下,以角度25°～30°斜行向上进针刺入皮下,针尖穿过横膈膜继续斜行刺入2.5～3.0cm.尾尖采血方法：手术剪剪去尾尖5～10 mm.颈静脉法：第4肋骨水平方向刺入皮肤,向颈静脉进针,表面成角度30°～40°向颈静脉刺入,刺入的深度约5mm.结果：腹主动脉采血法：腹主动脉采血78次,成功73次,成功率93.6%.眼眶后静脉丛的采血法：眼眶后静脉丛的采血法成功率89.9%.心脏穿刺采血法成功率82.4%.尾尖采血法成功率94.4%.颈静脉法成功率80.9%.结论：腹主动脉采血法适用于取血量大、不易溶血,不损伤器官,不会出现因操作不当造成的气栓与瘀血,有利于病理组织学检查.几种方法各有优缺点,各有注意事项.应根据自己的实验设计和要求来选择不同的采血方式.
在医学研究中常用大鼠制作疾病模型,是研究疾病发生机制和确定治疗方案、验证新型化合物与药标作用的有效性的较好工具[1-2].但因采血方法 不同有时可影响实验结果.大鼠的采血方法很多,虽有资料介绍,但不够详细.作者根据有关文献和多年工作经验,将大鼠采血方法作一介绍,以供参考.
采用SD大鼠300只,采血586次,其中采用腹主动脉采血法78次;眼眶后静脉丛的采血法128次;心脏穿刺采血方法134次;尾尖采血方法125次;颈静脉采血法121次.
将大鼠腹腔注射10%水合氯醛以0.03 mL /kg 麻醉,5 min后即可.仰卧固定在大鼠手术台上,背部放置一粗试管以充分腹主动脉,常规消毒后用手术剪刀沿腹正中线剪开腹腔.术者右手持穿刺针,针尖斜面朝 下,入针角度约25°～30°,朝向心端方向刺入,深度以5 mm左右为宜,抽吸血即可,可以反复采集多管的血样进行不同项目的测试,一般体重200～300 g大鼠可采血液8～10 mL,一般采3种血样全过程只需2 min.
将大鼠固定在实验台边缘,左手抓紧大鼠颈部皮肤固定头部,并轻轻向下颈两侧,使眼球充血.用事先准备好的10号金属针头顶端(针尖斜面朝内),垂 直插入内眦并向眼底方向转动以便切开静脉丛,血液便会连续不断地滴入采血管.用此法大约可取3～5 mL血液.取血完毕,立刻用脱脂棉止血.
麻醉同前,操作者右手持5.0 mL注射器,针头紧贴剑突下,以角度25°～30°斜行向上进针刺入皮下,边进针边缓缓回抽针管,针尖穿过横膈膜继续斜行刺入2.5～3.0 cm,约相当于5 mL注射器的针头长度,一旦感到针管有轻微搏动,表明针尖已进入心脏内,血液借心脏跳动的力量涌入注射器内,采血完成后拔出针头左手轻轻按压心脏搏动处,大鼠放回笼内,先单笼观察,待大鼠苏醒开始爬行时,再按性别分开喂养.
将大鼠固定好,用50 ℃左右温水浸泡尾部约2 min,血管充血后,棉球消毒、擦干鼠尾,用消术剪剪去尾尖5～10 mm,然后从尾根部向尾尖按摩,血自尾尖流出.此法可采1.5～2 mL血液.
颈静脉采血方法可不需要将大鼠麻醉后作颈静脉分离手术,也不需要器械固定,而是随用随抓(手法固定),将大鼠胸前区采血部位皮肤消毒,于胸前正中线肋骨水平先用注射器针头沿水平方向刺入皮肤,再向颈静脉所在沿皮下进针,针头到达颈静脉所在时,轻抽注射器内筒使之呈负压,再使注射器与 表面成角度30°～40°向颈静脉刺入,此时注射器应与颈静脉走行方向相一致,刺入的深度约5 mm,在试探性缓慢刺入或拔出时,如有血液自动流入注射器内筒,说明针尖已在颈静脉内,此时固定好大鼠,勿使注射器针头移动,也可将采血针抵在大鼠胸骨上以便于操作,抽引注射器,待血液足够时,拔出采血针,用干棉球按压止血.2、结果
腹主动脉采血法：腹主动脉采血78次,成功73次,成功率93.6%.眼眶后静脉丛的采血法：眼眶后静脉丛的采血128次,成功115次,成功率89.9%.心脏穿刺采血方法：心脏穿刺采血134次,成功111次,成功率82.4%.尾尖采血方法：尾尖采血125次,成功118次,成功率94.4%.颈静脉法：颈静脉采血121次,成功98次,成功率80.9%.腹主动脉采血法适用于取血量大,不易溶血,不损伤器官,不会出现因操作不当造 成的气栓与瘀血,有利于病理组织学检查.几种方法各有优缺点,各有注意事项.
实验大鼠需采血液进行某项研究时,其采血的成败乃是一个关键环节,如果因为采血技术而不能采集足量血液时,将会影响实验研究结果的观察.大鼠红细胞每 45～68 d更新一代,每小时进入血循环中的红细胞达2.4×107个;一次失血30%,1～2周内可以恢复[2].本实验表明：间隔10 d采血2 mL,对大鼠血液成份、营养状况及生命活动无明显影响,以1只250g体重的大鼠为例,血量约占其体重的6%～8%,大约相当于16 mL全血.一次采血2 mL,低于血量的30%,不会导致失血性休克[3-5].各种方法各有优缺点,还有腋动脉、股动脉、舌下静脉、挖眼眼球法、断头等采血方法[5-7].本文采血方法有以下特点：腹主动脉采血法取血量大、不易溶血,适用于多项目检测,不损伤器官不会出现因操作不当造成的气栓与瘀血等,有利于病理组织学检查.但操作比较复杂,技术性较强.应注意掌握适宜的麻醉深度,防止心跳骤停、减少出血、及大鼠躁动.眼眶后静脉丛的采血法简单易学,便于掌握. 血流较快,采血量多,能在较短时间内采到3～5 mL的鲜血.伤口较小,愈合较快.成功率高,死亡率低.应注意掌握好针头进针的深度,操作尽量快,防止凝血.心脏穿刺采血方位准确、操作简单、采血量 多,且1只大鼠可以重复多次采血而动物仍然成活是其最大特点.应注意浓度、用量力求准确.尾尖采血方法简单易行,操作方便,对鼠损伤小,但每次采血 量少,不适宜于需要抽取较多血的实验.尾尖采血伤口在外,大鼠尾部又不宜包扎,易感染,应注意防治感染.颈静脉法采血量(0.2 mL至近全血量)及采血次数(1～8次/天)可随分析目的而变动,适用于药代动力学等需连续少量取血的研究.但要求技术熟练,方能得心应手.在一定时间内,如果采血量和采血次数增加,会使大鼠引起一定的应激性反应或采血部位的[5-8].作者认为遵循“3R”原则(replacement替代,reduction减少,refinement优化),以最大限度地合理利用大鼠,减少大鼠的使用数量.根据自己的实验设计和要求,来选择不同的采血方式,尽量提高实验的精确性,有效避免因大鼠的个体差异带来的实验误差.
[4]崔志刚,腾海军,范丽静,等.套管连接法在大鼠心脏腹部移植模型中的应用[J].局解手术学,2003,12(1):4-5.
[5]赵洪礼.现代基础医学常用实验技术[M].:科学技术出版社,2002.211-212.
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