实验技能SOP：大鼠新生鼠灌注取脑及后固定规则(SOP)

　　流程：1)麻醉 2)开胸 3)心脏解剖 4)生理盐水冲水 5)4%多基甲醛固定 6)取脑 7)保存或切片.

　　一般方法为：4%多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装有800ml PBS的玻璃容器(烧杯或烧瓶)中,持续加热磁力搅拌至60～65℃,使成乳白色悬液.用1.0mol/L的NaOH值至7.0,使呈清亮状(滴加),过滤后定容至1000ml,室温或4℃保存备用.

　　3 麻醉后开胸：因老鼠较小,可冰冻麻醉,或者用量麻醉.沿肋弓下向左右剪开,至双侧腋中线向上剪开,然后向上翻起胸壁,充分心脏.

　　5 灌流：缓慢灌注PBS 10ml,见到老鼠两前肢及两肺变白可改灌注多聚甲醛,多聚甲醛的灌流也同PBS.

　　6 灌注成功的标志：刚开始灌注时老鼠剧烈抽动;成功后老鼠后肢绷直,尾部竖起成一直线;所灌注的脑组织白而硬.

　　8 后固定：灌流后的脑组织置于4%PFA置4度冰箱内进行后固定,时间>2h,过夜最好.

　　优点：可用单人用注射器直接完成,不用输液管架,而且平均每只仅需5～10ml固定液,时间也仅为5～10min.